OverExpress C41(DE3)感受态细胞

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BC212-01 OverExpress C41(DE3)感受态细胞 10×100μl 240 微信电话:15810761375
BC212-02 20×100μl 420

储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。


产品介绍:


OverExpress C41(DE3)菌株适用于毒性蛋白的表达,来源于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株,该菌株的基因突变降低了T7 RNA聚合酶的酶活性,下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpress C41(DE3)菌株也可以表达常规蛋白,相同条件下,蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)菌株属于B菌株,lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpress C41(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达1×107 cfu/μg DNA。


基因型:F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm (DE3)


菌株抗性:对氨苄青霉素,卡那霉素,氯霉素和四环素敏感。


质粒转化步骤:(以氨苄青霉素抗性的pET质粒为例):

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5 μl含有1-100 ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟,不要晃动。

3.42℃热击60秒钟,不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟,不要晃动。

5.加入500 μl的室温的SOC或LB培养基。

6.置于37℃摇床中,150-200 rpm,复苏培养60分钟。

7.取50-100 μl菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板37℃培养12-24小时。

(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000 rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100 μl左右的液体,用200 μl吸头轻轻吹打散菌块,取10 μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。)


蛋白表达步骤:

1.挑取单菌落,接种到含5 ml带抗生素的LB培养基中。

2.37℃,200 rpm震荡培养细菌至对数生长期(OD600=0.4-0.8)。

3.加入IPTG到终浓度为0.4 mM,37℃诱导4小时或16℃诱导过夜。(可以设定不同浓度的IPTG来诱导表达。)

4.诱导完成后,离心收集菌体,用合适的方法(如考马斯亮蓝染胶法,Western-Blot法或酶活性分析法)分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分,明确表达产物的表达状况(可溶性或不溶性表达)。

5.重组蛋白大量表达时,可用10 ml过夜培养物转接到1 L培养基中,当培养到OD600=0.4-0.8时,加入终浓度为0.4 mM的IPTG,37℃诱导4小时或16℃诱导过夜(不同蛋白表达的最佳条件有所不同,需在实验中优化)。


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