Tuner(DE3)感受态细胞

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BC211-01 Tuner(DE3)感受态细胞 10×100μl 240 微信电话:15810761375
BC211-02 20×100μl 420

储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。


产品介绍:

Tuner(DE3)为LacYZ突变型BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用IPTG的加入量来精准地控制重组蛋白的表达量,与pET系列载体联合使用,可以使得蛋白表达从低表达水平到高表达水平进行有效调控(使用低浓度的IPTG诱导重组蛋白低水平表达时,目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生物活性)。该菌株含有λ噬菌体DE3区,可以表达T7 RNA聚合酶。Tuner(DE3)菌株属于B菌株,lon和ompT蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成,pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg DNA。

基因型:F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcmlacY1(DE3)

菌株抗性:对氨苄青霉素,卡那霉素,氯霉素和四环素敏感。

质粒转化步骤:(以氨苄青霉素抗性的pET质粒为例)

1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后,加入1-5μl含有1-100ng的质粒DNA到细胞中,用手指拨打管底,轻轻混匀。

2.冰水浴中放置30分钟,不要晃动。

3.42℃热击60秒钟,不要晃动。

4.冰水浴中放置2分钟,不要晃动。

5.加入500μl的室温的SOC或LB培养基。

6.置于37℃摇床中,150-200rpm,复苏培养60分钟。

7.取50-100μl菌液涂布在含有氨苄青霉素抗性的LB平板上。待液体吸干后,倒置平板37℃培养12-24小时。


(平板划线分离法:复苏培养结束后,12000rpm离心30秒钟,弃掉上清,留100μl左右的液体,用200μl吸头轻轻吹打散菌块,取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上,倾斜吸头,用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落)。


(详情见说明书)

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