【新品】AGL1(pSoup)农杆菌感受态细胞

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BC312-01 【新品】AGL1(pSoup)农杆菌感受态细胞 20×100μl 420 微信电话:15810761375


储存条件:-70℃保存,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

基因型:C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine pSoup(tetR)

产品介绍:

农杆菌AGL1(pSoup)菌株为C58, RecA型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因(rif)和羧苄青霉素抗性基因(carb),为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。一些缺失农杆菌复制相关元件(如pVS1的复制起点REP区或pVS1质粒的STA区)的表达质粒如pGreen、pGreenII-62SK和pGs2等不能在AGL1菌株中繁殖。辅助质粒pSoup可以帮助这些不完整双元表达质粒在农杆菌中的复制并使AGL1(pSoup)菌株具有四环素(Tet)抗性。该菌适用于水稻、拟南芥和杨树等植物的转基因操作。AGL1(pSoup)农杆菌感受态细胞经特殊工艺制备,经pGs2质粒检测,转化效率可达103cfu/μg,-70℃保存12个月转化效率不发生改变。

转化方法:(采用冻融方法)

1. 取-70℃保存的AGL1(pSoup)农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化;

2. 无菌条件下,向感受态细胞中加入100ng-1μg质粒DNA(第一次使用,最好做一下预实验,确定所加质粒的最佳量),轻轻混匀,冰水浴中静置5 分钟;

3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟;(注:可用干冰和无水乙醇混合物代替液氮)

4. 然后快速将离心管置于37℃水浴中保持5分钟,不要晃动水面;

5. 将离心管放回冰水浴中,冰浴5分钟;

6. 无菌条件下加入800μl无抗生素的2xYT、SOB、SOC或LB液体培养基,于28℃振荡培养2-3小时,菌体复苏;

7. 6000rpm离心1分钟收菌,留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,取适量菌液,涂布于相应抗生素的LB平板上,于28℃培养箱中倒置培养48-72小时。(实验表明当平板只含有50μg/ml的Kan时,28℃培养48 h即可看到菌落;平板中含有50 μg/ml Kan和20 μg/ml Rif 时,需28℃培养60 h可看到菌落; 如果平板中含有50 μg/ml Kan和50 μg/ml Rif时则需要28℃培养72-90 h可看到菌落)。


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